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分光光度计利用道理及操作方式

更新时间:2019-08-01点击次数:

  分光光度法 道理:光是一种电磁波,具有必然的波长和频次。可见光的波长范畴正在 400-760nm,紫外光为 200-400nm,红外光为 nm。可见光因波长 分歧呈现分歧颜色,这些波长正在必然范畴内呈现分歧颜色的光称单色光。 操纵棱镜可将白光分成按波长挨次陈列的各类单色光,即红、橙、黄、 绿、青、蓝、紫等,这就是光谱。有色物质溶液可选择性地接收一部门可 见光的能量而呈现分歧颜色,而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红 外光的能量。 物质接收由光源发出的某些波长的光可构成接收光谱, 因为物质的分 子布局分歧,对光的接收能力分歧,因而每种物质都有特定的接收光谱, 并且正在必然前提下其 接收程度取该物质的浓度成反比,分光光度法就是利 用物质的这种接收特征对分歧物质进行定性或定量阐发的方式 。 正在比色阐发中,有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色 物质溶液的浓度及液层的厚度。当一束单色光映照溶液时,入射光强度愈 强,溶液浓度愈大,液层厚度愈厚,溶液对光的接收愈多,它们之间的关 系,合适物质对光接收的定量定律,即朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。这 就是分光光度法用于物质定量阐发的理论根据。 朗伯-比尔定律: 物理意义:当一束平行单色光垂曲通过某一平均非散射的吸光物质时, 取其吸光度 A 取吸光物质的浓度 c 及接收层厚度 b 成反比。 数学表达式:A=lg(1/T)=Kbc A——吸光度; T——透射比,是透射光强度比上入射光强度; K——为摩尔接收系数,它取接收物质的性质及入射光的波长 λ 相关; C——吸光物质的浓度; B——接收层厚度。 利用方式: 721 可见分光光度计其波长范畴 360~800nm,色散元件为三角棱形. 1.查抄仪器各调理钮的起始能否准确,接通电源开关,打开样品 室暗箱盖,使电表指针处于“0”位,预热 20min 后,再选择须用的单色光 波长和响应的放大活络度档,用调“0”电位器调整电表为 T=0%。 2.盖上样品室盖使光电管受光,鞭策试样架拉手,使参比溶液池(溶 液拆入 4/5 高度,置第一格)置于光上,调理 100%透射比调理器,使 电表指针指 T=100%。 3.反复进行打开样品室盖,调 0,盖上样品室盖,调 T 为 100%的操做 至仪器不变。 4.盖上样品室盖,鞭策试样架拉手,使样品溶液池置于光上,读出 吸光度值。读数后应当即打开样品室盖。 5.丈量完毕,取出比色皿,洗净后倒置于滤纸上晾干。各旋钮置于原 来,电源开关置于“关”,拔下电源插头。 6.放大器各档的活络度为:“l” ×1 倍;“2”×10 倍;“3”×20 倍,活络度顺次增大。因为单色光波长分歧时,光能量分歧,需选分歧的 活络度档。选择准绳是正在能使参比溶液调到 T= 100%处时,尽量利用活络 度较低的档,以提高仪器的不变性。改变活络度档后,应从头调“0”和 “100”。 留意事项: 1、该仪器应放正在干燥的房间内,利用时放置正在坚忍平稳的工做台上, 室内照明不宜太强。热天时不克不及用风扇间接向仪器吹风,防止灯胆灯丝发 亮不不变。 2、利用本仪器前,利用者该当起首领会本仪器的布局和工做道理,以 及各个旋钮之功能。正在未按通电源之前,该当对仪器的平安机能进行 查抄,电源接线应安稳,通电也要优良,各个调理旋钮的起始该当正 确,然后再按通电源开关。 测定方式: 1.选参比 测定试样溶液的吸光度,需先用参比溶液调理透光度为 100%(吸光度为 0) 以消弭其它成分及吸光池和溶剂等对光的反射和接收带来的测定误差 。 , 2.选方式:单组分和多组分 (1)单组分是指样品溶液中含有一种组分,或者是正在夹杂物溶液中待 测组分的接收峰取其他共有物质的接收峰无堆叠。有校准曲线法、尺度对 比法和接收系数法等。 校准曲线法(常用):配制一系列分歧含量的尺度溶液,选用适宜的参 比,正在不异的前提下,测定系列尺度溶液的吸光度,做 A-c 曲线,即尺度 曲线,也可用最小二乘数处置,得线性回归方程。 正在不异前提下测定未知试样的吸光度,从尺度曲线上就能够找到取之对 应的未知试样的浓度。